Los farmacéuticos y químicos se encuentran con muchas mezclas orgánicas naturales y mezclas de reacciones químicas en su trabajo. Como tal, un sistema de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es uno de los instrumentos más esenciales para cualquier laboratorio. Un instrumento de HPLC le permite separar y analizar estas mezclas (cuantitativa y cualitativamente). En este tipo de cromatografía en columna, el tamaño de partícula de la fase estacionaria es lo suficientemente pequeño como para dificultar el paso del disolvente a través de él; para superar eso, se aplica una alta presión de 3000-5000 psi. Es la técnica más sensible, eficiente y precisa.

Pasos

  1. 1 Siga las reglas y regulaciones y use su delantal.
    • Limpie la HPLC.
    • Enciéndalo y espere a que comience.
    • Prepare el instrumento para el análisis.
    • Mantenga el solvente / solventes en la fase móvil en el depósito de solvente o en la bandeja de solvente. El solvente se usa para separar los componentes de la mezcla. En instrumentos modernos, la mezcla de disolventes se puede utilizar como fase móvil que se denomina elución en gradiente. La elución es la separación en componentes.
    • Use metanol-agua o cloroformo-heptano, etc. como su solvente.
  2. 2 Seleccione los tipos de HPLC en función de la polaridad relativa de las fases:
    • Fase normal: utilice una fase estacionaria polar comparativa que la fase móvil si realiza la HPLC de fase normal.
    • HPLC de fase inversa: utilice una fase móvil menos polar en comparación con la fase estacionaria. Generalmente se usa la fase inversa.
  3. 3 Introduzca los datos en el sistema o programe la HPLC.
    • Asigne el número a los solventes cuando opte por la elución de gradiente.
    • Especifique la tasa de flujo.
    • Regule la presión de la bomba.
  4. 4 Analiza tu muestra
    • Agregue su muestra en el sistema del inyector. Este es el mecanismo que introduce la muestra (la mezcla que se va a separar) al sistema.
    • Cargue la fase estacionaria en la columna.
    • Inicie la HPLC haciendo clic en el botón de inicio en la pantalla de la computadora conectada.
    • Espere un tiempo para la separación de la mezcla en componentes. El tiempo de retención es el tiempo que toma el solvente para separar los componentes, que es igual al tiempo cuando ingresa la mezcla en la columna a cuando se detecta / analiza.
  5. 5 Desarrolla tus componentes. Espere a que su mezcla se separe en sus componentes. Esto se llama desarrollo, cuando los contenidos de la muestra serán detectados por el detector.
  6. 6 Observe el resultado. Mire la separación de los componentes detectados y grabados en el gráfico. Habrá varios picos correspondientes a los componentes y su concentración.
  7. 7 Aplica tus hallazgos a tu trabajo. Hay muchos usos de HPLC en farmacia, química e industrias como la producción de alimentos. Algunas de las aplicaciones importantes están siguiendo.
    • Úselo para el análisis cualitativo comparando el tiempo de retención observado en condiciones idénticas.
    • Haga uso de HPLC para el análisis cuantitativo, como la evaluación de la concentración de componentes.
    • Analiza la separación de lípidos
    • Úselo para respuestas en el trabajo forense en casos criminales / venenos.